ভুট্টার অ্যাফ্ল্যাটক্সিন পরিমাপ পদ্ধতি
ইংরেজি অ্যাফ্ল্যাটক্সিন (AFT) হল একটি যৌগ যা একটি ডিফিউরানিল রিং এবং কুমারিন (অক্সান্যাফথোকুইনোন) দ্বারা গঠিত। এটি অ্যাসপারগিলাস ফ্ল্যাভাস এবং অ্যাসপারগিলাস প্যারাসিটিকাস এর মতো স্ট্রেন দ্বারা উৎপাদিত হয়, যার আণবিক ওজন ৩১২-৩৪৬ এবং গলনাঙ্ক ২০০-৩০০ °C। এর স্থিতিশীল এবং উচ্চ তাপমাত্রা প্রতিরোধী বৈশিষ্ট্য রয়েছে এবং দীর্ঘ তরঙ্গ অতিবেগুনী আলোর অধীনে ফ্লুরোসেন্স তৈরি করতে পারে। এটি বিভিন্ন ফ্লুরোসেন্স রঙ, RF মান এবং কাঠামোর উপর ভিত্তি করে B1, B2, G1, G2, M1, M2, P1, R1, GM এবং বিষাক্ত অ্যালকোহলে বিভক্ত।
AFT জলে, ইথেন, ইথার এবং পেট্রোলিয়াম ইথারে অদ্রবণীয়, তবে মিথানল, ইথানল, ক্লোরোফর্ম, অ্যাসিটোনাইট্রিল এবং ডাইমিথাইলফর্মামাইডের মতো জৈব দ্রাবকগুলিতে সহজেই দ্রবণীয়। AFT ১-৩ pH এর অম্লীয় দ্রাবকগুলিতে সামান্য পচে যায়, ৯-১০ pH এর দ্রবণে দ্রুত পচে যায় এবং ভেঙে যায়, ক্ষারের সংস্পর্শে এলে দ্রুত পচে যায় এবং ৯-১০ pH এর ক্ষারীয় দ্রবণে প্রায় অ-বিষাক্ত লবণে পরিণত হয়। এটি অম্লীয় অবস্থায় হ্রাস করা যেতে পারে।
পরীক্ষার উদ্দেশ্য
অ্যাফ্ল্যাটক্সিন হল ছত্রাক দ্বারা উৎপাদিত কিছু অত্যন্ত বিষাক্ত কার্সিনোজেনিক পদার্থ। উচ্চ মাত্রার (১ মিলিগ্রাম/কেজি শরীরের ওজন) স্বল্পমেয়াদী গ্রহণ তীব্র বিষক্রিয়া ঘটাতে পারে, যেমন জ্বর, বমি, জন্ডিস বা লিভারের নেক্রোসিসের মতো সাধারণ লিভারের কর্মহীনতার লক্ষণ দেখা দিতে পারে। দীর্ঘমেয়াদী কম মাত্রার (২০ মাইক্রোগ্রাম/কেজি শরীরের ওজন) সংস্পর্শে লিভার ক্যান্সার, পাকস্থলীর ক্যান্সার এবং অন্যান্য রোগের ঝুঁকি উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করতে পারে। যেহেতু এটি ফসল এবং খাদ্যে ব্যাপকভাবে উপস্থিত এবং মানুষ ও প্রাণীর জন্য অনেক ক্ষতি করে, তাই খাদ্য নিরাপত্তা এবং জনস্বাস্থ্য নিশ্চিত করার জন্য দ্রুত এবং নির্ভুল সনাক্তকরণ পদ্ধতি স্থাপন অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ।
এই পরীক্ষার উদ্দেশ্য হল সলিড-ফেজ এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসোরবেন্ট অ্যাসে (ELISA) নীতির ব্যবহার করা, অর্থাৎ এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসোরবেন্ট অ্যাসে (ELISA), নমুনাগুলিতে অ্যাফ্ল্যাটক্সিন B1 এর পরিমাণ সীমিত এবং পরিমাপ করার জন্য, যা খাদ্য দূষণ ঝুঁকি মূল্যায়নের জন্য বৈজ্ঞানিক ভিত্তি প্রদান করে।
পরীক্ষামূলক সরঞ্জাম
ST-2000A মাইকোটক্সিন বিশ্লেষক
ভুট্টা, হোমোজেনাইজার, নাইট্রোজেন শুকানোর যন্ত্র, অসিলেটর, সেন্ট্রিফিউজ, গ্র্যাজুয়েটেড পিপেট, ব্যালেন্স (সংবেদনশীলতা ০.০১ গ্রাম), মাইক্রোপিপেট, মিথানল, এন-হেক্সেন, ক্লোরোফর্ম বা ডাইক্লোরোমিথেন বিকারক
পরীক্ষামূলক পদ্ধতি
পরীক্ষায় ব্যবহৃত সরঞ্জামগুলি পরিষ্কার, শুকনো এবং দূষণমুক্ত কিনা তা নিশ্চিত করার জন্য পরীক্ষা করুন
নমুনা নিষ্কাশন দ্রবণ প্রস্তুত করার জন্য মিথানল এবং ডিআয়োনাইজড জল ৭:৩ অনুপাতে মেশান
২ গ্রাম গুঁড়ো করা ভুট্টার নমুনা নিন এবং একটি ৫০ মিলি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে রাখুন। ৫ মিলি নমুনা নিষ্কাশন দ্রবণ যোগ করুন এবং ঘরের তাপমাত্রায় ৪০০০ rpm এ ৫ মিনিটের জন্য ঝাঁকান। এরপর, ০.৫ মিলি সুপারনাট্যান্ট নিন এবং ০.৫ মিলি ডিআয়োনাইজড জল যোগ করুন। ভালোভাবে মেশান
৪ °C রেফ্রিজারেটেড পরিবেশ থেকে প্রয়োজনীয় বিকারকগুলি বের করুন, সেগুলিকে ৩০ মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় সমতুল্য হতে দিন এবং ভালোভাবে ঝাঁকান। প্রয়োজনীয় সংখ্যক মাইক্রোপ্লেট এবং ফ্রেম বের করুন এবং ঘনীভূত ধোয়ার দ্রবণকে ডিআয়োনাইজড জল দিয়ে ২০ গুণ পাতলা করে কাজের ধোয়ার দ্রবণ তৈরি করুন।
নমুনা এবং স্ট্যান্ডার্ডের সংশ্লিষ্ট মাইক্রোপোরগুলিতে ক্রমানুসারে নম্বর দিন, প্রতিটি নমুনা এবং স্ট্যান্ডার্ডের জন্য ২ টি সমান্তরাল কূপ তৈরি করুন এবং স্ট্যান্ডার্ড কূপ এবং নমুনা কূপগুলির অবস্থান রেকর্ড করুন। তাদের নিজ নিজ মাইক্রোপোরে স্ট্যান্ডার্ড বা নমুনার ৫০ μl/কূপ যোগ করুন, তারপর এনজাইম মার্কারের ৫০ μl/কূপ যোগ করুন, এবং তারপর অ্যান্টিবডি ওয়ার্কিং সলিউশনের ৫০ μl/কূপ যোগ করুন। একটি কভার মেমব্রেন দিয়ে প্লেটটি সিল করুন, ৫ সেকেন্ডের জন্য আলতো করে ঝাঁকান এবং ভালোভাবে মেশান। ২৫ °C এ ৩০ মিনিটের জন্য প্রতিক্রিয়া করুন।
কভার ফিল্মটি সরান, কূপের ভিতরের তরল ঝাঁকিয়ে ফেলে দিন এবং প্রতিটি কূপের জন্য ২৫০ μl কাজের ডিটারজেন্ট দিয়ে ৫ বার ভালোভাবে ধুয়ে ফেলুন, প্রতিটি ধোয়ার মধ্যে ৩০ সেকেন্ডের ব্যবধান রাখুন। শোষক কাগজ দিয়ে শুকিয়ে নিন
প্রতিটি কূপের সাথে সাবস্ট্রেট দ্রবণ A (৫০ μl) যোগ করুন, তারপরে সাবস্ট্রেট দ্রবণ B (৫০ μl) যোগ করুন। ৫ সেকেন্ডের জন্য ঝাঁকান এবং ভালোভাবে মেশান। ১৫ মিনিটের জন্য ২৫ °C এ অন্ধকারে রঙ করুন।
প্রতিটি কূপের সাথে ৫০ μl টার্মিনেশন দ্রবণ যোগ করুন, আলতো করে ঝাঁকান এবং ভালোভাবে মেশান যাতে প্রতিক্রিয়া বন্ধ হয়।
অ্যাফ্ল্যাটক্সিন বিশ্লেষক ব্যবহার করে প্রতিটি কূপের শোষণ মান ৪৫০ nm এ পরিমাপ করুন (দ্বৈত তরঙ্গ ৪৫০/৬৩০ nm সুপারিশ করা হয়)। প্রতিক্রিয়া বন্ধ হওয়ার ১০ মিনিটের মধ্যে পরিমাপ সম্পন্ন করতে হবে
যন্ত্রটি পরিমাপ সম্পন্ন করে এবং স্বয়ংক্রিয়ভাবে ফলাফল প্রদান করে
পরীক্ষামূলক ফলাফল
পরীক্ষার পর, নমুনার অ্যাফ্ল্যাটক্সিন পরিমাণ প্রায় ০.১৯ug/kg, যা GB 2761-2017 "খাদ্যে ছত্রাক টক্সিনের সীমা সম্পর্কিত জাতীয় খাদ্য নিরাপত্তা মান" পূরণ করে।